二步法(无生物素PV6000 系列),实验步骤使用说明:
试剂盒组成
试剂A: 内源性过氧化物酶阻断剂
试剂B: Polymerized HRP-Anti Mouse或Rabbit IgG 3.0ml/6.0ml/18ml(根据一抗宿主而定)
PV6001(兔)适用于兔来源的一抗 3.0ml-/¥300.00 6.0ml/¥580.00 18ml/¥1780.00
PV6002(小鼠)适用于小鼠来源的一抗 3.0ml-/¥300.00 6.0ml/¥580.00 18ml/¥1780.00
PV6000 (通用型) 适用于兔,小鼠,大鼠来源的一抗 3.0ml-/¥400.00 6.0ml/¥750.00 18ml/¥1900.00
试剂盒规格及贮存条件
规格:3ml(50片)/6ml(120 片)/18ml(360 片)
贮存条件:本试剂盒宜4℃保存,稳定期1 年
免疫组化染色步骤
1、石蜡切片脱蜡和水化后,用PBS(pH7.4)冲洗三次,每次3分钟(3x3`)。
2、如果有必要,每张切片加1滴(试剂A)室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。 PBS冲洗3x3`。
4、除去PBS液,每张切片加1滴或50μl的第一抗体(用户自选),室温下孵育60分钟或4℃ 过夜,建议参见每种抗体的说明书。
5、PBS冲洗3x5`。除去PBS液,每张切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(试剂B),室温下孵育40分钟或37度孵育30分钟或4度过夜。PBS冲洗3x3`。
6、除去PBS液,每张切片加1滴或50μl新鲜配制的DAB或AEC溶液(详见DAB或AEC使用说明书),显微镜下观察3-5分钟(DAB)或10分钟(AEC)。
7、自来水冲洗,苏木素复染,若有必要,可用0.1%HCl分化,自来水冲洗,PBS返蓝。
8、如果用DAB显色,则切片经梯度酒精脱水干燥,(二甲苯透明),中性树胶封固;如果用AEC显色,则切片不能酒精脱水,而直接用水性封片剂。封片。 |